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    大鼠少突膠質前體細胞的使用和樣本的處理方法介紹

    發布時間:2021-11-17 點擊量:384
      大鼠少突膠質前體細胞使用方法:
      1、收到細胞后,請按照以下方法進行操作:取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態,然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。
      2、細胞傳代:
      1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,清洗細胞一次。
      2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1m至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中。
      3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養基重懸, 然后按1:2比例進行分瓶傳代,放入379C, 5%CO2細胞培養箱中培養。
      4)待細胞*貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。
      3、細胞凍存:
      1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次。
      2)添加胰蛋白酶消化液約1m至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中。
      3)用適量的凍存液懸細胞,并放置于凍存管中。
      4)先將大鼠少突膠質前體細胞凍存管放置于20°C 1.5h,然后將其移,入-80°C過夜, 24h后轉 入液氨中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80°C。
      正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的一步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法:
      1.血清。血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單,采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
      2.血漿。用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融,避免使用溶血或高血脂的標本。
      3.細胞培養上清,取細胞培養上清到離心管,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
      4.細胞裂解液。
      5.組織勻漿液。
      6、尿液、唾液等其他液體生物樣本。
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